超微量分光光度计的常识
1. A260nm——核酸吸收峰的吸收波长。
2. A280nm——蛋白吸收峰的吸收波长。
3. A230nm——是碳水化合物吸收峰的吸收波长。
4. A340nm——是基线校准波长，为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，表明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A340一般是0。
●A230产生负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。
●A260/A280比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯 RNA的A260/A280比值为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。
● A260/A230比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA和RNA的A260/A230比值为 1.8 – 2.2。若比值小于1.8表明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。当 260/230<1 时，通常只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。
样本的不同提取方法对检测的影响:
● */ Trizol萃取——残留试剂污染可以通过220至240nm之间的异常光谱以及260至280nm区域的偏移来表示。加氯仿离心后取上清的时候千万不要贪多，那样就很容易被蛋白污染。
●纯化柱提取——残留胍可能有助于230nm附近的峰值和从230nm到240nm的波谷偏移。
●磁珠法提取——残余珠可能会导致光散射，并导致异常光谱。
超微量分光光度计的操作注意事项:
1. A260/A280、A260/A230比值受溶液酸碱度及离子强度的影响，如酸溶液会使A260/A280比值降低，低离子强度和低 pH 溶液会增加 280 nm 处的光吸收值。因此必须确保空白检测和溶解样品所用Buffer的离子浓度和pH值一致。
2. 浓度接近2 ng/μl浓度的样品可能会导致不可靠的260/280和/或260/230的比值。
3. 样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在会干扰测试效果。样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。
4. 样品混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈。样品混合不均匀会直接导致检测不确定，重复性低。
5. 样品检测上样量不能太少，必须能够保证能后连接上下两根光纤形成光柱，从而使得检测正常进行。
6. 样品台清洁，在检测前，检测后以及连续使用仪器30分钟后均需要对上下接触样品的部位用双蒸水或纯水擦拭。
7. 切忌不可用喷壶在样品台上喷射，以防液体液体进入仪器内部造成损坏。
8. 切忌不可用洗涤剂或异丙醇清洁基座。
9. 仪器放置位置应当远离通风口，以免液滴蒸发太快导致浓度读数偏大。
