民族药锐猫棍多糖及总糖含量测定
苗药锐猫棍，即有柄石韦，贵州水质偏硬的多民族地区，泌尿系统中的结石病较为常见，而锐猫棍（有柄石韦）常被用来治疗该疾病，是贵州民间常用民族药物。有柄石韦在《神农本草经》一书中被记载具有多种药用功效，包括利尿通淋、清肺止咳以及凉血止血等。基于这些传统用途，市场上出现了许多以有柄石韦为主要成分的中成药，这些药品主要用于实现利尿和通淋的效果，其中包括复方石韦片、复方石韦颗粒和复方石韦胶囊等多种制剂。
有柄石韦富含黄酮类、酚酸类、多糖等化学成分，但关于多糖在药物功效的协同作用研究文献较少。课题组前期已对黔产有柄石韦展开了大量化学成分及药理作用研究，筛选出了一批具有良好利尿通淋功效的活性化合物，并在体内外实验中得到了验证。但中药民族药多为多成分调节的结果，为研究有柄石韦多糖在其利尿通淋的协作机制，本课题组拟对其多糖及总糖进行研究。
1 仪器与材料
1.1主要仪器
紫外可见分光光度计（上海美析仪器有限公司）；离心机；电热鼓风干燥箱；分析天平；水浴锅。
1.2试剂与材料
无水乙醇、石油醚、95％乙醇、正丁醇（分析纯ＡＲ，天津市富宇精细化工有限公司）；5％苯酚、98％浓硫酸（重庆川东化工集团有限公司）；蒸馏水、葡萄糖（分析纯ＡＲ，国药集团化学试剂有限公司）。
1.3样品
锐猫棍
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
在对无水葡萄糖进行105℃干燥至恒重后，精确称取545.6mg的样品并将其置入一个1000mL的量瓶中，接着加水进行溶解，并稀释至刻度，充分混匀后即可获得浓度为545.6mg/L的葡萄糖溶液。接下来，从这一溶液中精确吸取15mL，并定容至25mL，从而制备出浓度为327.36mg/L的对照品溶液。然后，分别吸取0.0mL、0.3mL、0.6mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL和1.8mL的葡萄糖对照品溶液，放置于25mL的比色管中，利用蒸馏水补足至2mL，随后精确加入3mL的浓硫酸和1mL的5％苯酚溶液，充分混合后放置在沸水中加热15分钟。取出后放入冷水中冷却5分钟，再次取出并在490ｎm的波长下测量吸收度。通过将吸收度Ａ作为纵坐标，浓度Ｃ作为横坐标绘制出标准曲线。
2.2供试品溶液制备
有柄石韦的供试样品首先经过风干处理，随后粉碎，再在60℃的环境下烘干至恒重。接着，取约1.0g的供试样品进行精密称定，按照“2.3.2”项下的操作步骤进行脱脂和色素的提取，以及去除其中的单糖、低聚糖及醇溶性杂质。随后，样品在100℃的水浴中进行三次提取，最后将滤液合并、浓缩，并将体积定容至100mL。最后，精密吸取10mL的浓缩液，并用水稀释至50mL，从而得到所需的实验溶液。
2.3多糖的测定
2.3.1半透膜的制备 取10mL火棉胶溶液，缓缓将其倒入150mL的锥形瓶中。在此过程中，小心地旋转锥形瓶，使得火棉胶在瓶壁上形成一层厚薄均匀的薄膜。随后，将多余的火棉胶液体倒回原瓶中。接着，将锥形瓶倒置于铁架台的铁圈上，等待剩余的火棉胶完全流尽。待溶液充分挥发后，轻轻用手指触碰火棉胶表面，直至不再感到粘手为止。此时，往锥形瓶中注满水，浸10min，倒去瓶中的水，然后在瓶口揭开一部分膜，在膜与瓶壁间加入适量的水，使膜与瓶壁分开，轻轻取出薄膜，半透膜灌水悬空，袋中水能逐渐渗出为合格。
2.3.2多糖的提取与精制 取自风干的黔产有柄石韦样品，首先将其粉碎，并在60℃的环境下烘干至恒重。接着，精确称取30g的有柄石韦粉末，用纸包好放置于索氏提取器中，经过石油醚的回流提取，以去除脂肪及色素，重复提取两次，每次持续3小时。提取后的液体被弃置，药渣在挥去溶媒后，随后进行80％乙醇的回流提取，同样进行两次，每次持续4小时。在再次处理完药渣后，加入蒸馏水并在100℃的水浴中提取三次，使用250mL、200mL和200mL的水，每次提取时间为2小时。提取后的药液随后合并，通过抽滤进行浓缩，然后使用Ｓｅｖａgｅ法离心以去除蛋白质，转速为3000ｒ/min，从而获得多糖溶液。接下来的步骤是将该溶液置于半透膜中进行24小时的滴水透析，随后添加无水乙醇以使乙醇的质量分数达到80％。此混合物在4℃的冰箱中静置24小时。最后，离心处理以获得多糖沉淀，并用丙酮、氯仿和无水乙醇进行两次洗涤，最后在60℃条件下烘干至恒重，从而得到纯化的有柄石韦多糖，存放于干燥器中以备后用。
2.3.3换算因素的测定 精确称取60℃下干燥至恒重的有柄石韦多糖4.0mg（共6份），将其溶解并定容至50mL。然后，精确量取2mL溶液置于25mL比色管中，依次加入3mL浓硫酸和1mL的5％苯酚溶液，充分混匀后，将比色管置于沸水中加热15分钟。随后取出比色管，放置于冷水中冷却5分钟。最后，在490ｎm波长处测定其吸收度。结果：平均换算因素ｆ＝1.164，ＲＳＤ为0.3％。
2.3.4方法学考察 精密度试验中，我们精确吸取了2.0mL的黔产有柄石韦供试品溶液，并进行了六次快速连续的吸光度测定。根据标准曲线的条件进行分析，结果显示平均吸光度为0.4420，且相对标准偏差（ＲＳＤ）为0.95％，这表明仪器在精密度方面表现良好。
在稳定性试验中，我们同样精确吸取了2.0mL的石韦供试品溶液，并按照标准曲线的要求进行了操作。每隔0.5小时测定一次吸光度，共进行六次测定。结果显示平均吸光度为0.4417，ＲＳＤ为0.64％，这说明仪器具备良好的稳定性。
进行重复性试验时，我们精密称取了6份1.0g的黔产有柄石韦样品粉末，并按照供试品的制备方法制备供试液，遵循标准曲线的条件进行测定。结果显示平均含量为4.950％，且ＲＳＤ为0.8％，表明具有较好的重复性。
在回收率试验中，我们称取了9份0.5g的黔产有柄石韦样品粉末，经石油醚和乙醇提取后，分别按样品量的80％、100％、120％添加葡萄糖对照品溶液（各3份）。随后，按照有柄石韦供试品的制备方法制备供试液并进行测定。结果显示平均回收率为99.40％，ＲＳＤ为0.94％，这表明该方法具有良好的回收率。
2.3.5样品中多糖的测定 首先，准确称取有柄石韦供试品1.0g，共准备6份样品。接着，按照既定的供试品溶液制备方法进行供试液的制备，随后进行相应的测定。
2.4总糖的测定
2.4.1总糖的提取及供试品溶液的制备 选取风干的黔产有柄石韦样品后，将其粉碎，然后在60℃的环境下进行烘干，直到样品达到恒重状态。接着，精确称量1.0g的石韦粉末，放入索氏提取器内，使用石油醚进行回流提取，以去除样品中的脂质和色素，此过程重复进行两次，每次持续3小时。在完成提取后，弃去提取液。随后，将药渣中的溶剂挥发掉，在100℃的水浴中，向药渣中加入50mL的水，进行三次提取，提取时间为3小时、2小时和2小时。最后，将所得滤液合并，进行浓缩，并调整体积至100mL。从中取出2mL的母液，再稀释定容至25mL，即可得到所需的提取液。
2.4.2样品总糖的测定 精密称取1.0g有柄石韦样品（共6份），然后按照预定的供试品溶液制备方法制备供试液，并进行相关测定。
方法来源：[1]吕振涛,胡春梅,杨武德.民族药锐猫棍多糖及总糖含量测定[J].微量元素与健康研究,2024,41(06):62-64.
