紫外可见分光光度法测定白喉乌头中总生物碱的含量

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试材料

白喉乌头。

1.1.2供试试剂

乌头碱对照品；无水乙醇；氨水。

1.1.3供试仪器

电子天平；Ｃ型玻璃仪；循环水真空；旋转蒸发器；UV-1500PC紫外可见分光光度计（上海美析仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱；调温电热套；电脑智能温控低温超声波合成萃取仪。

其它仪器：烧杯（5、10、50mL）、容量瓶（10、25、50mL）、移液管（2mL、1mL）、吸耳球、漏斗、滤纸、量筒、吸量管、移液枪。

1.2试验方法

1.2.1标准溶液的制备

精密称取乌头碱对照品0.0109mg，以无水乙醇水溶液为溶剂，于50mL容量瓶中配置成0.002mg·L^－1的对照品标准储备液，4℃的冰箱中保存。

1.2.2样品测试液的提取

精密称取白喉乌头粉碎的样品粗粉5g置于50mL锥形瓶中，加入0.50mL氨试液，润洗。再加35.0mL无水乙醇，超声波提取3次，每次提取0.5ｈ。将提取物用滤纸过滤，残渣用无水乙醇洗3～4次，保留滤液，再过滤3～4次，然后合并滤液。通过水浴使溶剂挥发至无氨味。精密吸取该溶液于50mL容量瓶中，再用乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成供试溶液。按照标准曲线的绘制方法测定一阶导数紫外光谱，计算总生物碱的含量，每批样品重复6次。

1.2.3最大吸收定波长的选择

吸取2mL滤液至10mL容量瓶中，加入乙醇稀释至刻度。取适量的该溶液至比色皿中，用可见分光光度计，在200～400ｎm波长范围内测定吸光度，最后确定乌头碱对照品的最大吸收波长（表1）。

1.2.4标准曲线的绘制

用移液管分别移取0.002mg·L^－1乌头碱对照品溶液2、4、6、8、10mL于10mL的容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，放置10min，以空白的无水乙醇溶液为参比，在最大吸收波长231ｎm处用紫外可见分光光度计测定其吸光度。

1.3项目测定（样品总生物碱的含量测定）

精密吸取4份1.00mL白喉乌头样品溶液，置于25.00mL容量瓶中，各加入无水乙醇至10.00mL。各加入5％亚硝酸钠溶液0.28mL，摇均，放置6min；加10％硝酸铝溶液0.28mL，摇均，放置6min；加4％氢氧化钠溶液2.00mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇均，放置15min。以无水乙醇为对照，采用分光光度法在507ｎm处测定吸光度。根据标准曲线计算所取样品溶液中总生物碱含量。根据吸光度的值计算溶剂中总生物碱的浓度。

总生物碱提取率（％）＝提取液浓度（mg·L^－1）×稀释倍数×体积（mL）／称取样品（g）×100。

方法来源：[1]阿不力米提·玉麦尔,库尔班江·巴拉提.紫外可见分光光度法测定白喉乌头中总生物碱的含量[J].北方园艺,2022,(12):94-98.