紫外可见分光光度法测定肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖及总皂苷的含量

引言

肉苁蓉配方茶是以肉苁蓉、淫羊藿、刺五加、红枣和正山小种为原料制成的具有抗疲劳效果的保健食品。研究表明，肉苁蓉配方茶原料中含有较多潜在的抗疲劳成分，如肉苁蓉、淫羊藿、红茶中的多糖类、皂苷类、多酚类和黄酮类物质，可通过调节代谢、抗氧化作用、神经保护等方式延缓外周及中枢疲劳、减少自由基过度积累而起到抗疲劳作用[1-4]。因此，明确肉苁蓉配方茶中黄酮类、皂苷类、多糖类和多酚类的含量，对于确定发挥抗疲劳作用的主成分，进而对产品进行精准质量控制，以及进一步研究可能的抗疲劳机制具有十分重要的意义。本研究采用紫外分光光度法对肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖和总皂苷的含量进行测定与分析，为产品质量控制提供实验依据，也为配方茶的相关研究提供参考。

1　材料与方法

1.1　材料与试剂

肉苁蓉配方茶。

芦丁标准品、没食子酸标准品、D-无水葡萄糖、紫丁香苷；浓硫酸（分析纯），；高氯酸（分析纯）；甲醇、乙醇、乙醚、冰乙酸和苯酚（分析纯）；福林酚；亚硝酸钠、香草醛、氢氧化钠和碳酸钠；硝酸铝。

1.2　仪器与设备

UV-1900型紫外可见分光光度计（上海美析仪器有限公司）、分析天平、电热恒温水浴锅、数控超声波清洗器、低温高速离心机和旋蒸蒸发仪。

1.3　对照品溶液的制备

1.3.1　芦丁溶液制备

精密称取芦丁对照品0.1000g，置于100mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，超声溶解，得1mg·mL-1的芦丁贮备液。精密移取1mg·mL-1的芦丁标准品溶液10mL置于50mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得200μg·mL-1的芦丁标准品溶液（总黄酮对照品溶液），以备显色。

1.3.2　没食子酸溶液制备

精密称取0.0093g没食子酸标准品置于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得93μg·mL-1的没食子酸标准品溶液。精密移取5mL没食子酸标准品溶液置于25mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，得18.6μg·mL-1的没食子酸标准品溶液（总多酚对照品溶液），以备显色。

1.3.3　D-葡萄糖溶液制备

精密称取D-无水葡萄糖对照品0.01025g，加水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得102.5μg·mL-1的D-葡萄糖标准品溶液（总多糖对照品溶液），以备显色。

1.3.4　紫丁香苷溶液制备

精密称取紫丁香苷对照品0.01005g，加甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，得1005μg·mL-1的紫丁香苷标准品溶液（总皂苷对照品溶液），以备显色。

1.4　供试品溶液的制备

1.4.1　总黄酮及总多酚样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约0.25g，每批次3份，共9份，置于50mL容量瓶中，加入20mL70%乙醇超声20min，移取上清液置于100mL容量瓶中，重复超声5次，合并上清液冷却后，用70%乙醇定容至刻度，即得供试品溶液，以备显色。

1.4.2　总多糖样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0g，每批次3份，共9份，分别置于100mL圆底烧瓶中，加蒸馏水15mL，100℃回流提取1h，放至室温，用脱脂棉过滤到离心管中，并加入无水乙醇至溶液乙醇体积分数为65%，摇匀，置于4℃冰箱静置过夜（12h）。第2天，对提取溶液3000r·min-1离心10min，弃去上清液，加入5mL的65%乙醇溶液洗涤沉淀，以上操作重复3次，离心后留下的沉淀物加水使其溶解并定容到100mL容量瓶中，即得实验样品溶液，以备显色。

1.4.3　总皂苷样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0g，每批次3份，共9份，分别置于100mL圆底烧瓶中，加入50mL75%乙醇在80℃下回流提取2次，每次1h。冷却后在5000r·min-1下离心10min，合并提取液，将离心上清液收集后在旋转蒸发仪上浓缩至干，浓缩物加蒸馏水定容至100mL容量瓶中。取1mL上清液，移入装有D101大孔吸附树脂的层析柱（10mL注射器当作层析柱，填料填到6cm左右），用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱，收集洗脱液转移至蒸发皿中，用60℃水浴蒸发至干。蒸发皿中的蒸干物，用5mL甲醇溶解，用0.45μm滤膜过滤即得样品液。取1mL转移至具塞试管，在70℃下水浴蒸干，以备显色。

1.5　显色方法

1.5.1　总黄酮样品和芦丁对照品溶液的显色

总黄酮样品与芦丁对照品溶液中分别加入5%亚硝酸钠0.4mL，静置5min，加入10%硝酸铝0.4mL，静置5min，后加入4%氢氧化钠4mL，加蒸馏水定容至10mL，摇匀，静置15min，即显色完成。

1.5.2　总多酚样品和没食子酸对照品溶液的显色

总多酚样品与没食子酸对照品溶液中分别加入0.5mL福林酚溶液，加蒸馏水至6mL，摇匀后加1.5mL10%碳酸钠，蒸馏水定容至10mL。75℃下水浴加热10min，避光放凉，即显色完成。

1.5.3　总多糖样品和D-葡萄糖对照品溶液的显色

总多糖样品与D-葡萄糖对照品溶液中分别加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热15min，再置于冰水浴中冷却5min，加水定容至10mL，即显色完成。

1.5.4　总皂苷样品和紫丁香苷对照品溶液的显色

总皂苷样品与紫丁香苷对照品蒸干物中分别加入0.2mL5%香草醛-冰乙酸溶液，使残渣溶解，再加入0.8mL高氯酸，混匀后移入试管中，盖紧盖子在60℃水浴加热20min，取出，冰浴冷却5min后，准确加入5mL冰乙酸，摇匀，即显色完成。

1.6　标准曲线的绘制

（1）芦丁标准曲线绘制。精密移取200μg·mL-1的芦丁对照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL和3.0mL置于10mL容量瓶中，按1.5.1显色。以随行试剂作空白对照，在510nm波长处测定吸光度，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X，吸光度为纵坐标Y，进行线性拟合。

（2）没食子酸标准曲线绘制。精密移取18.6μg·mL-1的没食子酸对照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL和2.5mL置于10mL容量瓶中，按1.5.2显色。以随行试剂作空白对照，在760nm处测定吸光度，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X、吸光度为纵坐标Y，进行线性拟合。

（3）D-葡萄糖标准曲线绘制。精密移取102.5μg·mL-1的D-葡萄糖对照品溶液0.5mL、0.8mL、1.1mL、1.4mL、1.7mL和2.0mL置于10mL容量瓶中，按1.5.3显色。以随行试剂作空白对照，在波长490nm处测定吸光度，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X、吸光度为纵坐标Y，进行线性拟合。

（4）紫丁香苷标准曲线绘制。精密移取1005μg·mL-1的紫丁香苷对照品溶液70μL、100μL、130μL、160μL、190μL、220μL和250μL至10mL试管中，70℃下水浴蒸干，蒸干物按1.5.4显色。以随行试剂作空白对照，在波长553nm处测定吸光度，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X、吸光度为纵坐标Y，进行线性拟合。

1.7　含量测定

1.7.1　总黄酮

精密称取肉苁蓉配方茶约0.25g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.1制备样品溶液，精密移取各供试品溶液2mL置于10mL容量瓶中；按照1.5.1显色，在510nm处测定吸光度，按线性回归方程计算总黄酮含量。

1.7.2　总多酚

精密称取肉苁蓉配方茶约0.25g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.1制备样品溶液，精密移取各供试品溶液1mL置于50mL容量瓶中；按照1.5.2显色，在760nm处测定吸光度，按线性回归方程计算总多酚含量。

1.7.3　总多糖

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.2制备样品溶液，精密移取各供试品溶液1mL置15mL具塞试管中，按照1.5.3显色，加水定容至15mL；以随性溶液为空白对照溶液，在490nm处测定吸光度，按线性回归方程计算总多糖含量。

1.7.4　总皂苷

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.3制备样品溶液，精密移取各供试品溶液各1mL置于15mL试管中，水浴蒸干，按照1.5.4显色；以随行试剂作空白对照，在553nm处测定吸光度，按线性方程计算总皂苷含量。

方法来源：[1]闫洛美,扎克亚古丽·吾加买提,郝娟,等.紫外可见分光光度法测定肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖及总皂苷的含量[J].食品安全导刊,2024,(24):94-100.DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2024.24.059.